Nannostomus bifasciatus är en allätare som i sin naturliga miljö främst äter insekter och liknande. I akvariet tar den gärna emot smått levande och fryst foder, men den kan även acceptera torrfoder vid behov. Arten är en romspridare, men den äter gärna upp sin egen rom. Leken sker öppet i akvariet och äggen sprids fritt ut, vanligtvis hamnar de bland finbladiga växter som till exempel javamossa eller så faller de ner till botten. Efter ungefär 1-2 dygn kläcks äggen och det tar ytterligare några dagar innan ynglen är fullt utvecklade.
Tvåbandade pennfisk är känd som en fredlig art, och för att främja dess välbefinnande bör den hållas i små stim på 10-12 exemplar. Om man håller för få individer kan de bli rätt skygga och nervösa. För att skapa en trivsam miljö för dessa fiskar kan de hållas tillsammans med andra små och fredliga fiskar. Ett lämpligt akvarium för denna art innehåller relativt tätt med växter, gärna med en del flytväxter, och ett mörkt bottenmaterial för att efterlikna dess naturliga miljö. Rötter kan också användas som gömställen i akvariet. Rent och klart vatten är att föredra för arten.
Det är inte så stor skillnad mellan könen hos Nannostomus bifasciatus, men det finns några detaljer som skiljer dem åt. Hanarna har oftast mer blåvitaktiga bukfenor, medan honornas fenor är mer transparenta.
